磁珠法核酸提取常見(jiàn)問(wèn)題的原因分析及解決辦法：

  問(wèn)題1、磁珠殘留

  原因：(1)磁珠：粒徑小、表面基團(tuán)松散磁含量低；(2)設(shè)備：磁分離方式、磁場(chǎng)弱；(3)操作：參數(shù)設(shè)置不合適。
  解決辦法：(1)篩選、替換匹配的磁珠； (2)更換磁珠；(3)放慢磁介入速度并延長(zhǎng)吸附時(shí)間。

  問(wèn)題2、磁珠結(jié)塊

  原因：(1)微球吸附過(guò)多雜質(zhì)(蛋白、脂質(zhì)、多糖)； (2)微球粒徑太小；(3)洗滌完畢，乙醇干燥時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。
  解決辦法：(1)優(yōu)化裂解液結(jié)合液配方； (2)選擇粒徑較大的微球；(3)縮短干燥時(shí)間。

  問(wèn)題3、純度差

  原因：(1)裂解不充分； (2)微球分散性不好； (3)微球吸附能力太強(qiáng)。
  解決辦法：(1)優(yōu)化試劑裂解液配方； (2)篩選合適粒徑及表面的磁珠；(3)磁珠表面鈍化處理。

  問(wèn)題4、得率低

  原因：(1)磁珠吸附能力較弱； (2)磁珠洗脫效率較弱；(3)提取試劑(pH、鹽、醇)與磁珠不匹配。
  解決辦法：(1)改變表面基團(tuán)種類(lèi)及密度；(2)減少干燥時(shí)間、加熱洗脫；(3)優(yōu)化試劑配方。

  關(guān)鍵因子及對(duì)提取的影響

  在進(jìn)行核酸提取或純化時(shí)，必須密切注意一些因素，如pH值、鹽濃度、溫度、緩沖體積和潛在的乙醇污染。這些因素中的每一個(gè)都會(huì)極大地影響下游實(shí)驗(yàn)的得率、質(zhì)量和成功率。
  1.非最適pH值或鹽濃度可改變核酸的電荷，導(dǎo)致核酸不能與離心柱結(jié)合，或?qū)е卤椒?氯仿錯(cuò)誤的溶解核酸。
  2.緩沖液體積不正確，可導(dǎo)致不完全裂解，中和或間接稀釋洗脫的核酸。
  3.乙醇污染可以抑制下游的酶反應(yīng)，并使樣品從瓊脂糖凝膠中飄浮出來(lái)。
  磁珠法核酸提取可以簡(jiǎn)單、快速、高效地實(shí)現(xiàn)多種類(lèi)型樣本的核酸提??；不僅可以節(jié)省時(shí)間，還可以減少手工操作引起的失誤，提高每次實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可重復(fù)性及均一性。

  

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