磁珠法核酸提取試劑是現(xiàn)在常用的核酸提取試劑,利用納米級的微生物磁珠,與核酸發(fā)生吸附反應,然后利用試劑經(jīng)過裂解、洗脫步驟,得到純度較高的核酸。那么磁珠法核酸提取試劑常見成分有哪些呢?關于這個問題,很多人都不太清楚,那么今天慧慶小編就為大家?guī)硐嚓P介紹。
磁珠法核酸提取試劑常見成分及作用
1、SDS(十二烷基硫酸鈉)
十二烷基硫酸鈉是一種陰離子表面活性劑,對人體有微毒性,它也是一種很好的發(fā)泡劑,被廣泛的用于洗衣粉、牙膏、洗發(fā)水、滅火器上。十二烷基硫酸鈉易溶于熱水中,當水溫≥8℃時,其溶解度會隨著水溫的升高而快速升高,當水溫升至70℃時,溶液度變化不明顯。
作用:十二烷基硫酸鈉能夠使得分子間和分子內(nèi)的氫鍵斷裂,使得分子去折疊,破壞蛋白分子的二、三結構,使得蛋白質(zhì)變性。在高溫環(huán)境下,其能夠破壞蛋白質(zhì)與核酸的結合,促進核酸釋放。
2、蛋白酶K(Protein K)
蛋白酶K是由白色念珠菌分離出來的一種強力蛋白溶解酶,它有著比較高的比活性,是核酸提取的關鍵試劑。
作用:提取核酸時,蛋白酶K的主要作用是將與核酸結合的組蛋白酶解,使得核酸能夠游離在溶液中。
3、聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100--曲拉通)
這是一種非離子表面活性劑,其在水中不易解離,在溶液中穩(wěn)定性也很高,不容易受到強電解質(zhì)無機鹽類的影響。
作用:曲拉通X-100能夠與生物膜中的磷脂等脂質(zhì)結合形成可溶性復合物;疏水端也能與膜蛋白的疏水區(qū)結合形成復合物,溶解于溶液中。
4、異硫氰酸胍(GITC)
異硫氰酸胍是強有力的蛋白質(zhì)變性劑,它能夠迅速地將蛋白質(zhì)溶解,使得細胞結構破碎,核蛋白由于其二級結構的破壞消失而迅速地與核酸分離開來。其也是RNA提取試劑TRIZOL的主要成分。
5、乙二胺四乙酸(EDTA)
乙二胺四乙酸是鈣、鎂離子螯合劑,它能夠抑制脫氧核糖核酸酶對DNA的降解作用(DNase作用時需要一定的金屬離子作輔基)。
6、三羥甲基氨基甲烷(Tris-Hcl)
三羥甲基氨基甲烷(Tris)溶液與鹽酸混勻后形成的緩沖劑,為裂解液及核酸提供一個比較適宜的環(huán)境。
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