核酸是生命的基本物質(zhì)之一,根據(jù)化學(xué)組成不同,可以將核酸分為DNA和RNA。核酸是分子生物學(xué)研究的基礎(chǔ),而提取到的核酸質(zhì)量的高低也直接影響到了下游實驗的成敗。核酸提取純化的方法有很多,接下來慧慶小編就為大家分享常見的核酸提取純化方法有哪些。
常見的核酸提取純化方法
1、煮沸裂解法
此方法是手動提取核酸,采用煮沸裂解法提取核酸,提取到的核酸的量相對較少且雜質(zhì)多,提取到的核酸可能會出現(xiàn)斷裂,這種方法主要適用于一些粗略的實驗。
2、酚氯仿抽法
此方法屬于傳統(tǒng)的核酸提取方法,利用兩種不同的有機(jī)溶劑交替抽提,將蛋白去除,獲得純化后的核酸。酚氯仿抽提的優(yōu)勢是成本比較低,對實驗條件要求較低,提取到的DNA保持天然狀態(tài)。獲得的DNA純度高、片段大、效果良好,缺點是操作較為繁瑣,且酚和氯仿都對人體有一定的危害。
3、陰離子去污劑法
陰離子去污劑法是利用SDS或二甲苯酸鈉等去污劑使蛋白質(zhì)變性,然后就可以直接從生物材料中提取DNA。由于細(xì)胞中DNA與蛋白質(zhì)之間常借靜電引力或配位鍵結(jié)合,同時陰離子去污劑能夠破壞這種價鍵,所以常用陰離子去污劑提取DNA此方法操作簡單,也能夠提取到較高分子量DNA,但所得產(chǎn)物含糖類雜質(zhì)較多,因此并未得到廣泛使用。
4、離心柱法
離心柱法是利用核酸表面覆蓋的由水分子構(gòu)成的薄膜,在高鹽環(huán)境下,親水膜會遭到破壞,而核酸則被吸附在離心柱上,其他的雜質(zhì)經(jīng)過離心沉淀后與核酸分離,得到純化后的核酸。此方法的缺點是核酸流失多,以及無法大量提取核酸。
5、磁珠法
磁珠法是廣泛應(yīng)用的核酸提取純化方法,目前多用于診斷行業(yè),它能夠?qū)崿F(xiàn)高通量、自動化操作,因此很受歡迎。此方法是利用磁珠的超順磁性,吸附核酸,核酸與磁珠結(jié)合后,經(jīng)過數(shù)次洗滌與磁場捕獲,洗脫下來的核酸即可通過PCR或其它特定方法來檢測特定的DNA或RNA。主要用于從人血清或血漿樣品中提取DNA和RNA。
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