核酸是重要的生物信息分子,也是生物學(xué)研究中主要的實驗對象,通過核酸人們能夠獲取到很多信息。而想要從生物樣本中提取到核酸,就需要核酸提取試劑的輔助,目前市面上常見的核酸提取試劑有磁珠法核酸提取試劑、離心柱法核酸提取試劑、溶液型提取試劑等,試劑不同,原理也是不同的,接下來慧慶小編就為大家介紹不同核酸提取試劑原理是什么。
不同核酸提取試劑原理
1、磁珠法核酸提取試劑原理
磁珠法核酸提取試劑是近年來應(yīng)用的比較多的核酸提取試劑,主要是利用經(jīng)過表面修飾的生物磁珠對核酸的特異性識別以及高能效吸附性能,達到提取核酸的目的。具體的原理是:利用氧化硅納米微球的超順磁性,在 Chaotropic 鹽(鹽酸胍、異硫氰酸胍等)和外加磁場的作用下,能從血液、動物組織、病原微生物等樣本中的 DNA 和 RNA 分離出來。使用此類試劑,能夠快速地將核酸提取出來,得到的核酸純度也很高。
2、離心柱法核酸提取試劑
離心柱法核酸提取試劑的提取原理是利用裂解液的特性,將生物細胞中的核酸釋放出來,然后將釋放出來的核酸吸附在特定的硅載體上,這種特定的硅載體只對核酸有親和力和吸附力,不會吸附其他多余的生化成分,如蛋白質(zhì)、脂類以及多糖等,這些都不會被吸附。再把吸附在特異載體上的核酸用洗脫液洗脫下來,分離得到純化的核酸。此類試劑提取到的核酸質(zhì)量也不錯,但是提取速度相對較慢。
3、溶液型提取試劑
溶液型提取試劑是比較傳統(tǒng)且經(jīng)典的核酸提取試劑,主要是利用各類有機溶劑和鹽的作用,來達到提取核酸的目的。除了提供合適的裂解環(huán)境,還包括抑制樣品中核酸酶在裂解過程中對核酸的破壞(如 EDTA )、維持核酸結(jié)構(gòu)穩(wěn)定(如 NaCl )等。有機溶劑通過使蛋白質(zhì)變性、破壞膜結(jié)構(gòu)、去除與核酸相連的蛋白質(zhì),從而實現(xiàn)核酸游離在裂解體系中。由于苯酚、氯仿等為有毒揮發(fā)性試劑、核酸回收率低、損失量大、流程繁瑣等缺點已逐漸被吸附柱法和磁珠法所取代。
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