想要從生物樣本中提取出核酸，離不開(kāi)核酸提取試劑的輔助，利用核酸提取試劑從生物樣本中提取核酸時(shí)，可能會(huì)遇到一些問(wèn)題，影響到核酸提取的結(jié)果。那么核酸提取試劑使用常見(jiàn)問(wèn)題有哪些呢？針對(duì)這個(gè)問(wèn)題，慧慶小編為大家總結(jié)了一些內(nèi)容，接下來(lái)就為大家?guī)?lái)相關(guān)介紹。
  

  一、核酸提取試劑提取DNA常見(jiàn)問(wèn)題

  

  1、提取的細(xì)菌基因組DNA有降解

  
  出現(xiàn)這種情況建議先確認(rèn)選用的培養(yǎng)菌體是否新鮮，如果菌體需要進(jìn)行儲(chǔ)存時(shí)，請(qǐng)將其保存在零下80℃的環(huán)境中。還有一種原因可能是起始菌液量過(guò)多，導(dǎo)致菌液裂解不充分，部分DNA降解。由于菌體本身富含DNA酶活性，建議先加入消解溶液然后再加入EDTA溶液來(lái)抑制內(nèi)源性核酸酶，解決DNA降解問(wèn)題。
  

  2、A260/280比值較低/高

  
  A260 值比較低可能是由于用水作為洗脫液，或是有蛋白質(zhì)殘留。如果在操作過(guò)程中使用了苯酚，那么很有可能是由于苯酚殘留導(dǎo)致比值低。比值高的原因是由于有大量的RNA殘留，或者是沒(méi)有使用RNaseA，或RNaseA活性下降。
  

  3、提取的DNA活性差

  
  活性差是核酸提取試劑提取DNA的常見(jiàn)問(wèn)題之一，原因有兩點(diǎn)，一個(gè)是提取的基因組DNA中鹽分濃度過(guò)高，這種情況建議操作時(shí)嚴(yán)格安裝說(shuō)明書進(jìn)行操作。另一個(gè)是由于提取的基因組DNA中含有乙醇，建議離心的速度和時(shí)間應(yīng)該嚴(yán)格遵循說(shuō)明書要求進(jìn)行。

  二、核酸提取試劑提取RNA常見(jiàn)問(wèn)題

  

  1、RNA得率低

  
  原因可能是由于該組織或是細(xì)胞中RNA的含量偏低。不同的生物細(xì)胞和組織中RNA的豐度是不同的，比如肝臟、心臟以及胰腺等是RNA高豐度的組織，而胚胎、腎臟、肺、腦、胸腺以及卵巢等屬于中豐度組織，低豐度的組織分別是脂肪、骨以及膀胱。
  
  其次樣本量過(guò)少或者過(guò)多也會(huì)導(dǎo)致RNA得率低。樣本量過(guò)少，細(xì)胞中RNA含量低，得率自然也低；樣本量過(guò)多則很有可能超過(guò)了裂解液的裂解能力范圍，導(dǎo)致裂解不完全，使得得率降低。
  

  2、RNA降解

  
  導(dǎo)致RNA講解的原因有三點(diǎn)，提取材料不新鮮、處理樣品的量太大以及RNase被污染。新鮮組織取得后應(yīng)立即置于液氮中或立即放入RNAstore試劑中，以保證提取效果。
  

  3、RNA中有基因組DNA污染

  
  導(dǎo)致這種情況發(fā)生的原因有幾點(diǎn)，一個(gè)是樣本中的核酸含量過(guò)高，提取過(guò)程中沒(méi)有去除干凈，建議進(jìn)行多次抽提。其次是RNA的沉淀?xiàng)l件不合適，使得DNA也被提取出來(lái)。還有就是溶液的 pH 值偏小，容易使 DNA 形成沉淀。
  
  以上就是慧慶小編針對(duì)核酸提取試劑使用常見(jiàn)問(wèn)題有哪些問(wèn)題帶來(lái)的相關(guān)介紹，希望能夠?qū)Υ蠹矣兴鶐椭?。如果您還有其他疑惑，歡迎隨時(shí)來(lái)電咨詢洛陽(yáng)慧慶生物科技有限公司，我們會(huì)及時(shí)解答您的疑惑。