磁珠法核酸提取是現(xiàn)在常用的DNA提取手段，它有著檢測靈敏度高、可自動化操作、安全且快速等特點(diǎn)，在生物檢測中得到了廣泛應(yīng)用。但是在核酸提取過程中，經(jīng)常也會有這種問題出現(xiàn)，今天慧慶小編就為大家介紹磁珠法核酸提取常見的問題及解決辦法。

  磁珠法核酸提取常見的問題及解決辦法

  1、裂解效果不好

  出現(xiàn)這種情況，多數(shù)屬由于裂解液出現(xiàn)問題導(dǎo)致的。有人會想要用增加裂解液使用量的方式來解決，但是在磁珠法核酸提取過程中，隨著裂解液體積的增大，磁珠與核酸碰撞幾率降低，磁珠吸附核酸效率降低，可能導(dǎo)致核酸提取量降低、核酸提取純度降低等問題。增加裂解液使用量帶來的負(fù)面影響往往大于正面。

  如果裂解效果不好，可以調(diào)整裂解液的配方、裂解方式、裂解時間或是減少樣品量等來進(jìn)行解決。

  2、核酸降解

  出現(xiàn)這種情況多數(shù)原因是由于樣品的反復(fù)凍融，其次也可能是由于在提取過程中剪切力、磁珠表面不均勻、洗脫溫度過高和提取流程時間過長導(dǎo)致的。解決辦法就是避免樣品反復(fù)凍融，以及操作過程中出現(xiàn)的問題。

  3、核酸純度不高

  核酸提取純度不高，主要污染原因?yàn)榈鞍准埃ɑ颍}類殘留?？稍谔崛∵^程中加入蛋白酶K降解樣品中的蛋白，減少蛋白殘留污染，同時用高濃度有機(jī)溶劑對核酸進(jìn)行清洗，減少鹽殘留對酶活的抑制。

  4、提取的核酸得率低

  將樣品量與試劑配比控制在合理的范圍內(nèi)，避免超過裂解能力。其次在洗脫的步驟，使用足量的洗脫液洗脫并充分混勻，避免有團(tuán)塊殘存；實(shí)驗(yàn)耗材要匹配，如不同的吸附柱或磁珠的核酸吸附能力不同，也會影響核酸的得率。

  5、磁珠結(jié)團(tuán)

  磁珠結(jié)團(tuán)是核酸提取過程中經(jīng)常遇到的現(xiàn)象，尤其手工操作時，這是由磁珠本身特性和磁珠所處試劑環(huán)境兩方面造成的，有些磁珠不僅在全血DNA提取過程中會結(jié)團(tuán)，其他的樣本也同樣會結(jié)團(tuán)，其實(shí)結(jié)團(tuán)現(xiàn)象可以用來提前預(yù)判實(shí)驗(yàn)結(jié)果，結(jié)團(tuán)往往是吸附了大量核酸，如果哪次實(shí)驗(yàn)沒有結(jié)團(tuán)，本次的實(shí)驗(yàn)結(jié)果或許會不太好，不過也不能一概而論，雜質(zhì)太多也是引起磁珠結(jié)團(tuán)的原因。通過修改試劑配方，優(yōu)化試劑用量，可以改善磁珠的結(jié)團(tuán)現(xiàn)象，這就需要對各種參數(shù)進(jìn)行調(diào)整。

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