磁珠法核酸提取的提取速度快、操作簡(jiǎn)單方便，被生物實(shí)驗(yàn)室和醫(yī)學(xué)機(jī)構(gòu)廣泛使用。但是偶爾在核酸提取過(guò)程中會(huì)有核酸提取得率低的情況，這對(duì)于核酸檢測(cè)結(jié)果有很大的影響，出現(xiàn)這種情況的原因是什么呢？接下來(lái)慧慶小編就為大家介紹磁珠法核酸提取得率低的原因和解決辦法。

  磁珠法核酸提取得率低的原因和解決辦法

  

  1、裂解不充分

  
  原因：提取核酸時(shí)，需要使用裂解液讓細(xì)胞進(jìn)行裂解，裂解后的細(xì)胞會(huì)釋放出核酸，但是由于樣本的類型復(fù)雜且多變，因此不同樣本的裂解難易程度也會(huì)有區(qū)別。如果裂解不充分，細(xì)胞釋放出來(lái)的核酸有限，即使生物磁珠的吸附能力很強(qiáng)，也很難有比較高的得率。
  
  解決辦法：針對(duì)裂解不充分問(wèn)題，建議通過(guò)提高胍鹽濃度以及表面活性劑濃度的方式，來(lái)增加裂解液的裂解能力。這是由于胍鹽和表面活性劑能夠破壞蛋白的高級(jí)結(jié)構(gòu)，促進(jìn)膜蛋白的變性，使得細(xì)胞膜破裂。
  

  2、結(jié)合能力不足

  
  原因：結(jié)合能力不足通常有兩方面的原因，一是由于生物磁珠的問(wèn)題導(dǎo)致，比如采用的生物磁珠比表面積太小，功能基團(tuán)比較少，從而導(dǎo)致磁珠的核酸吸附能力變?nèi)?；另外一個(gè)原因是結(jié)合緩沖液的結(jié)合能力比較弱。
  
  解決辦法：如果是磁珠的問(wèn)題導(dǎo)致，建議選擇比表面積大且功能基團(tuán)多的生物磁珠，通常情況下磁珠的粒徑越小，比表面積越大，但是同時(shí)磁相應(yīng)也會(huì)偏弱，所以選擇磁珠需要根據(jù)實(shí)際的樣本情況來(lái)定。
  
  如果是結(jié)合緩沖液的問(wèn)題，那么可以通過(guò)提高醇的比例來(lái)增強(qiáng)結(jié)合能力，同時(shí)，也要提高離液鹽（胍鹽、鈉鹽等）的濃度來(lái)促進(jìn)核酸與磁珠的結(jié)合。
  

  3、洗脫不充分

  
  原因：有時(shí)候明明裂解結(jié)合液還有各種條件都已經(jīng)優(yōu)化得很好了，但是提取到的核酸得率依然不高，這種情況有可能是磁珠雖然與核酸結(jié)合了，但是洗脫不充分，與磁珠結(jié)合的核酸沒(méi)有被洗脫下來(lái)。
  
  解決辦法：這種情況建議進(jìn)行二次洗脫增加產(chǎn)量或提高洗脫體積。
  
  除了以上三種因素以外，得率的高低還與樣本以及個(gè)體的差異有關(guān)，不同的樣品核酸含量差異也比較大。
  
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