磁珠法核酸提取是現(xiàn)在常用的核酸提取方法,它有著靈敏、快速、簡單、重復性好、提取率高的優(yōu)點,被廣泛應用于生物實驗室以及各項醫(yī)學檢測上。雖然磁珠法核酸提取已經(jīng)被廣泛應用,但是在提取過程中也有一些誤區(qū),接下來慧慶小編就為大家介紹磁珠法核酸提取過程中的常見誤區(qū)。
磁珠法核酸提取過程中的常見誤區(qū)
1、磁珠越多,提取效果就越好
在出現(xiàn)核酸提取效果不佳的情況,很多人的想法就是增加生物磁珠的用量,覺得這樣就能夠吸附更多核酸,提取效果也就更好,這種方法是不可取的。生物磁珠與液體的比例都是有一定閾值的,超過這個比例,過多的生物磁珠在液體內(nèi)無法均勻分散,影響到提取效果。小編建議,在提取效果不佳的時候,大家可以嘗試減少生物磁珠的使用量,這樣反而能夠達到提升提取率的效果。
提醒大家,通常磁珠法試劑盒給出的磁珠參考用量都是略微過量的,因此需要增加生物磁珠的用量來改善提取效果的情況并不多。如果已經(jīng)確定是由于生物磁珠用量不足而導致的核酸提取效果不好,那么是可以通過增加生物磁珠的用量來改善核酸提取效果的。
2、試劑使用的越多,提取效果越好
細胞裂解效果不好?多加點裂解液。洗滌效果不好?多加點洗滌液。這應該是很多使用者在使用磁珠法核酸提取試劑盒中的慣性思維,但是對于磁珠法而言,每增加一部分的液體體積,就減少了生物磁珠碰撞的幾率。而降低生物磁珠碰撞的幾率,也會導致吸附率大大降低。
磁珠法核酸提取的核心就是生物磁珠吸附核酸的效率,如果無法保證生物磁珠的碰撞效率,那么核酸提取效率也無法得到保證,所以采用增加試劑使用量的方法來改善核酸提取效果并不一定有效。
3、洗滌次數(shù)越多,提取效果越好
提取過程中如果得到的核酸雜質(zhì)過多,很多使用者都會考慮多進行幾次洗滌,來得到更加純凈的核酸。雖然增加了洗滌的次數(shù)確實有利于提取純凈的核酸,但是每次洗滌都會損傷一定量的核酸,并且還會增加核酸斷裂水解的幾率,因此建議將洗滌次數(shù)控制在2~4次。
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